幽门螺杆菌vacA毒性片段与hpaA融合基因的原核表达

如果一种蛋白能够包括H pylori的两种或多种有效抗原成分其刺激机体将会产生多重免疫保护性反应有利于防治H pylori的感染.为了实现这个目的我 们构建了融合基因进而表达融合蛋白. 朱森林et al 利用减毒活鼠伤寒沙门菌能表达异种抗原在哺乳动物中经口鼻直肠和阴道黏膜途径免疫能诱导强大而特 异的免疫反应的将载有HPAA基因的重组表达质粒导入减毒鼠伤寒沙门菌SL3216 构建成表达HPAA重组减毒鼠沙门疫苗菌发现HPAA能在疫苗中以二聚体形 式稳定表达表达量为全菌体蛋白的17% 并证实具有免疫原性. 研究表明vacA 基因和HpaA 基因的原核表达产物均有免疫原性并在治疗和预防H pylori 感 染中起到良好作用. 我们将vacA 的毒性片段v 和HpaA基因连接表达融合蛋白若不影响免疫原性制备抗VacA 和HpaA 抗体将既能中和已感染的H pylori 产生 的VacA 使其不引起细胞病变又能阻止H pylori 在胃内定植防止H pylori 的再感染起到预防和治疗作用. 此类融合蛋白和疫苗尚未见报道.

由于融合蛋白作为一个整体其一级结构已经改变而一级结构是决定蛋白质空间构象的基础. 因此融合蛋白就有可能具有与单独的蛋白不同的空间构象 从而影响各组分蛋白各自功能的发挥. 一般认为以接头连接可以比直接连接融合蛋白减少上述影响. 我们构建 HpaA-V融合蛋白的原核表达载体中间加上IL-3N端的接头12 个氨基酸期望HpaA与V 互不干扰而形成各自的天然构象从而同时获得具有两种抗原特性的 重组蛋白达到预期的效果.

我们表达的融合蛋白必须具有单独HpaA与VacA免疫原性才能使机体产生针对HpaA与VacA的免疫,成为制备疫苗的有效抗原. Western blotting 分析表明 表达的蛋白能与H pylori阳性血清反应有良好的抗原性但是否同时具有HpaA与VacA二者的免疫原性尚需进一步鉴定.